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選擇性清除內(nèi)毒素的方法之超濾法

發(fā)布時(shí)間: 2023-09-04  點(diǎn)擊次數(shù): 1305次

避免任何微生物污染及其內(nèi)毒素釋放的有效而安全的方法是在生產(chǎn)和運(yùn)輸過(guò)程中保持絕對(duì)的無(wú)菌。如果采用某種去污染措施,必須保證得到足夠的終產(chǎn)物。Anspach等積累多年的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出,從含蛋白質(zhì)溶液和不含蛋白質(zhì)的溶液中去除內(nèi)毒素是有很大區(qū)別的。對(duì)于不含蛋白質(zhì)的溶液,可采用那些利用內(nèi)毒素與水、鹽和其他一些小分子物質(zhì)的分子大小不同來(lái)去除內(nèi)毒素的方法。下面介紹選擇性清除內(nèi)毒素的方法之超濾法。

9.1選擇性清除內(nèi)毒素的方法之超濾法.png

凝膠過(guò)濾色譜法能從無(wú)蛋白質(zhì)的溶液中去除80%以上的內(nèi)毒素活性。

超濾類似于血透,是用一種相對(duì)分子質(zhì)量大約為10000的膜,通常所用的水是超純水,整個(gè)操作系統(tǒng)使用的儀器均為沒有內(nèi)毒素污染的無(wú)菌設(shè)備。另外,在這種條件下內(nèi)毒素主要以聚集物的形式存在,所以更加安全可靠。但是需要注意的是,雖然這是一個(gè)緩慢的過(guò)程,然在溫度較高(~100℃)或酸性環(huán)境下(pH3.54.5)時(shí),部分內(nèi)毒素分子被分解,從而使內(nèi)毒素分子的實(shí)際毒性部分脂質(zhì)A(相對(duì)分子質(zhì)量2000~4000)大量釋放出來(lái),給內(nèi)毒素的去除帶來(lái)麻煩。

超濾法也可將內(nèi)毒素從相對(duì)分子質(zhì)量小的產(chǎn)物溶液中去除,如葡萄糖、鹽、許多化學(xué)物和不能透過(guò)射線的物質(zhì)以及大多數(shù)抗生素等。相對(duì)分子質(zhì)量為10000的膜也可用于此,產(chǎn)物通過(guò)膜彌散的同時(shí)內(nèi)毒素卻被膜扣留。為了使蛋白質(zhì)產(chǎn)物也能順利彌散出來(lái),膜的孔徑必須大于相對(duì)分子質(zhì)量100000的蛋白質(zhì)的直徑。在蛋白質(zhì)存在的情況下,內(nèi)毒素聚合物分離而成為較小的單體,正如在EDTA或膽酸存在的情況下一樣,內(nèi)毒素單體和蛋白質(zhì)在大小上相接近,兩者均能通過(guò)超濾膜。

1998年,LiLuo找到了一個(gè)提高蛋白質(zhì)分離度的方法,他們?cè)诤?/span>85mmol/L血紅蛋白和5mol/ml內(nèi)毒素的溶液中加入45mmol/LCa2+以改變內(nèi)毒素溶液的結(jié)構(gòu),使之成為大的聚合體從而減少內(nèi)毒素量至6ng/L。用相對(duì)分子質(zhì)量為300000的超濾膜可以使血紅蛋白透過(guò)。但是這種方法對(duì)于那些溶解度受高Ca2+濃度影響小的蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō),使用價(jià)值有限。


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